FADS6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435879

Descripción general

La desaturasa de ácidos grasos 6 (FADS6) es una enzima asociada a membrana implicada en la introducción de dobles enlaces en ácidos grasos poliinsaturados, lo que influye en la composición lipídica y en la señalización lipídica downstream. Al moldear los reservorios de ácidos grasos bioactivos y sus derivados, FADS6 puede afectar la fluidez de la membrana, la función de los orgánulos y la homeostasis metabólica en células y tejidos de ratón. La actividad relacionada con Fads6 se entrecruza con redes más amplias de desaturación y elongación de ácidos grasos que coordinan el balance energético y la disponibilidad de mediadores inflamatorios. La desregulación de las vías lipídicas asociadas a desaturasas se estudia con frecuencia en el contexto del estrés metabólico, la acumulación de lípidos hepáticos, los requerimientos lipídicos del neurodesarrollo y los fenotipos inflamatorios en modelos preclínicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FADS6 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fads6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fads6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fads6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FADS6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fads6 para la investigación de la señalización de FADS6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Fads6 críticos para la función de FADS6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fads6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FADS6 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FADS6 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fads6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FADS6 (m) y el plásmido HDR FADS6 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fads6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fads6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.