ERdj3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404935

概要

DNAJB11は、小胞体（ER）内腔に存在するHsp40共シャペロンであるERdj3をコードしており、BiP/HSPA5と協働して新たに合成された分泌タンパク質や膜タンパク質のフォールディングを促進し、凝集を抑制します。ERdj3は、BiPのATPase活性を刺激し、ER関連分解（ERAD）に結び付いた品質管理の判断を調整し、ERストレス下でのアンフォールドド・プロテイン・レスポンス（UPR）シグナルを調節することで、小胞体プロテオスタシスに関与します。これらの機能を通じて、DNAJB11は分泌経路の効率や、ミスフォールドタンパク質負荷への細胞適応に影響を与えます。こうした過程は、腎・肝の病態やがんに伴うストレス応答など、プロテオスタシスの破綻を特徴とする疾患に関与すると考えられています。シャペロンネットワークにおける役割から、ERストレスがアポトーシス、炎症、代謝リモデリングとどのように統合されるかを研究するうえでも重要です。

ERdj3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDNAJB11遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DNAJB11内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DNAJB11のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ERdj3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ERdj3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DNAJB11欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ERdj3の機能に不可欠なDNAJB11エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DNAJB11ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ERdj3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびERdj3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DNAJB11遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ERdj3 HDRプラスミド（h）および ERdj3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDNAJB11ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDNAJB11標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。