EMBP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422395

Panoramica

Prg2 codifica la proteina basica maggiore degli eosinofili (EMBP), una proteina dei granuli altamente cationica espressa negli eosinofili che contribuisce alle funzioni effettrici dell’immunità innata nei siti mucosali e infiammatori. In seguito alla degranulazione, EMBP può legarsi a membrane cariche negativamente e a componenti della matrice extracellulare, influenzando l’integrità della barriera epiteliale, le risposte citotossiche e il rimodellamento tissutale. L’attività di EMBP interseca vie che regolano l’attivazione degli eosinofili, il reclutamento dei leucociti e la segnalazione infiammatoria, rendendo Prg2 un marcatore utile e un nodo meccanicistico nei modelli di infiammazione allergica e patologia delle vie aeree. Nei sistemi murini, la perturbazione di Prg2 aiuta a analizzare l’immunopatologia guidata dagli eosinofili e le interazioni ospite–tessuto rilevanti per fenotipi infiammatori cronici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EMBP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prg2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prg2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prg2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EMBP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prg2 per lo studio della segnalazione di EMBP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prg2 critici per la funzione di EMBP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prg2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EMBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EMBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prg2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EMBP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EMBP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prg2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prg2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.