Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420081

概要

マウスDvl2は、細胞質性の足場タンパク質であるDishevelled 2（DVL2）をコードし、Frizzled受容体から下流のWnt経路へシグナルを伝達します。DVL2は、受容体近傍の複合体を組織化し、細胞骨格のダイナミクス、極性、トラフィッキングを制御することで、カノニカルなWnt/β-カテニンシグナルと、非カノニカルな平面内細胞極性（PCP）およびWnt/Ca²⁺カスケードを統合します。これらの機能を通じてDVL2は、胚のパターニング、幹／前駆細胞の挙動、組織恒常性に寄与し、その制御破綻は、発生異常や腫瘍性シグナルプログラムに結び付く異常Wntシグナルの文脈でしばしば検討されます。Dvl2は細胞移動や形態形成への影響という観点からも研究されており、β-カテニン依存的転写とPCP出力の間の経路バランスが重要となります。

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDvl2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dvl2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dvl2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dvl2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2の機能に不可欠なDvl2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dvl2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDvl-2/Dishevelled 2/DVL2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dvl2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 HDRプラスミド（m）および Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDvl2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDvl2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。