DnaJB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420974

概要

Dnajb3は、Hsp70と協働してタンパク質の折り畳み、再折り畳み、ならびにミスフォールドしたポリペプチドの選別・処理（トリアージ）を調節するHsp40/DnaJ共シャペロンファミリーの一員であるDnaJB3をコードします。DnaJB3は、Jドメインを介してHsp70のATPアーゼ活性を促進することで、細胞のプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の維持に寄与し、タンパク質品質管理に関連するストレス応答経路を支えます。これらの過程は、小胞体ストレス応答や、細胞毒性の高いタンパク質負荷条件下での細胞生存に影響するタンパク質分解・除去機構とも交差します。シャペロンネットワーク機能の変調は、プロテオスタシス不全やストレスシグナルの異常が疾患関連表現型に寄与する代謝機能障害および神経変性のモデルにおいて、広く重要性を持ちます。

DnaJB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDnajb3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dnajb3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dnajb3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DnaJB3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DnaJB3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dnajb3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DnaJB3の機能に不可欠なDnajb3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dnajb3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DnaJB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDnaJB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dnajb3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DnaJB3 HDRプラスミド（m）および DnaJB3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDnajb3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDnajb3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。