DNA pol γ2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407382

Descripción general

POLG2 codifica la subunidad 2 de la ADN polimerasa gamma, un factor accesorio que se une a la subunidad catalítica POLG para aumentar la procesividad y favorecer una replicación y reparación del ADN mitocondrial (ADNmt) de alta fidelidad. Esta proteína actúa en el contexto de la biología del nucleoide mitocondrial y es esencial para mantener el número de copias del ADNmt, la integridad del genoma y la capacidad de fosforilación oxidativa. La alteración de la dinámica de replicación dependiente de POLG2 puede contribuir al agotamiento del ADNmt o a la acumulación de deleciones, vinculando la inestabilidad del genoma mitocondrial con fenotipos de enfermedades mitocondriales neuromusculares y multisistémicas. Por ello, POLG2 se estudia ampliamente en vías que regulan la biogénesis mitocondrial, las respuestas al estrés replicativo y la señalización impulsada por el metabolismo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DNA pol γ2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen POLG2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del POLG2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de POLG2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DNA pol γ2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en POLG2 para la investigación de la señalización de DNA pol γ2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de POLG2 críticos para la función de DNA pol γ2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de POLG2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DNA pol γ2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DNA pol γ2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus POLG2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DNA pol γ2 (h) y el plásmido HDR DNA pol γ2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología POLG2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana POLG2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.