Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dermatopontin (h): sc-402924

Présentation

DPT code pour la dermatopontine, une protéine de la matrice extracellulaire riche en tyrosine qui se lie au collagène et module l’organisation de la matrice, l’adhérence cellulaire et la signalisation cellule–matrice. La dermatopontine influence l’assemblage et le remodelage de la matrice extracellulaire en affectant la fibrillogenèse du collagène et en s’interfaçant avec des voies régulées par des facteurs de croissance, notamment des réponses associées au TGF-β qui façonnent l’activité des fibroblastes. Des altérations de l’expression de DPT ont été liées au remodelage fibrotique, à la dynamique de cicatrisation et à des modifications stromales observées dans de multiples contextes pathologiques. En tant que composant stromal de la MEC, la dermatopontine est également pertinente pour étudier comment les signaux du microenvironnement régulent la migration cellulaire, la mécanotransduction et l’architecture tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dermatopontin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DPT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DPT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DPT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dermatopontin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DPT pour l'étude de la signalisation de Dermatopontin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DPT essentiels à la fonction de Dermatopontin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DPT pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dermatopontin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Dermatopontin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DPT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dermatopontin plasmide HDR (h) et le Dermatopontin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DPT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DPT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.