DDAH I CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402719

概要

DDAH1は、非対称性ジメチルアルギニン（ADMA）および関連するメチルアルギニンを加水分解する細胞質酵素であるジメチルアルギニン・ジメチルアミノヒドロラーゼ1（DDAH I）をコードしており、これにより一酸化窒素合成酵素（NOS）活性と細胞内の一酸化窒素（NO）バイオアベイラビリティを調節します。ADMA–NO軸の制御を通じて、DDAH Iは内皮機能、レドックスバランス、血管トーン、ならびに炎症性シグナル伝達経路に影響を及ぼします。DDAH1の発現や活性の変化は心血管系および代謝系の表現型と関連づけられており、内皮機能障害や酸化ストレスの文脈でしばしば検討されます。DDAH1はまた、NO依存的なシグナル伝達が血管新生や細胞遊走に影響する腫瘍生物学や組織リモデリングの分野でも研究されています。

DDAH I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDDAH1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DDAH1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DDAH1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DDAH Iタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DDAH Iシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DDAH1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DDAH Iの機能に不可欠なDDAH1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DDAH1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DDAH I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDDAH I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DDAH1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DDAH I HDRプラスミド（h）および DDAH I HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDDAH1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDDAH1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。