Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 6A (m): sc-421354

Présentation

Krt6a code la cytokératine 6A, une protéine de filament intermédiaire de type II qui forme des hétérodimères avec les kératines de type I afin de constituer le cytosquelette de kératine dans les épithéliums stratifiés. Elle est rapidement induite lors de la réparation des plaies, en réponse au stress mécanique et aux signaux inflammatoires, en favorisant la migration et la prolifération des kératinocytes ainsi que le renforcement de la barrière. La cytokératine 6A s’intègre aux programmes de remodelage du cytosquelette et à la dynamique des jonctions, influençant l’intégrité épithéliale et la résilience tissulaire. Une expression altérée de Krt6a est associée à des états épidermiques hyperprolifératifs et à des défauts de kératinisation, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’homéostasie cutanée et des réponses épithéliales au stress dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 6A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Krt6a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Krt6a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Krt6a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cytokeratin 6A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Krt6a pour l'étude de la signalisation de Cytokeratin 6A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Krt6a essentiels à la fonction de Cytokeratin 6A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Krt6a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cytokeratin 6A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Cytokeratin 6A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Krt6a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cytokeratin 6A plasmide HDR (m) et le Cytokeratin 6A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Krt6a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Krt6a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.