Cytokeratin 15 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401869-ACT

KRT15 codifica a citoqueratina 15, uma proteína de filamento intermediário do tipo I enriquecida em compartimentos epiteliais basais e frequentemente utilizada como marcador de estados progenitores e semelhantes a células-tronco em queratinócitos. A citoqueratina 15 contribui para a integridade do citoesqueleto, para a dinâmica de adesão célula–célula e para as respostas epiteliais ao estresse por meio da montagem de filamentos de queratina e da comunicação cruzada com programas de diferenciação e reparo de feridas. Sua expressão está ligada à homeostase e à remodelação epitelial, com associações relatadas a estados de diferenciação alterados na pele e em outros epitélios estratificados. Padrões desregulados de KRT15 têm sido estudados em contextos de hiperproliferação epitelial, plasticidade de células tumorais e biologia do folículo piloso, sustentando sua utilidade em estudos mecanísticos de comprometimento de linhagem e regeneração tecidual.

Cytokeratin 15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KRT15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cytokeratin 15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KRT15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KRT15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cytokeratin 15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KRT15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cytokeratin 15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cytokeratin 15 em células tumorais com expressão de KRT15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.