Cyclophilin 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426720

概要

Ppidは、HSP90/HSP70複合体内でTPRドメインを持つコシャペロンとして機能する、ペプチジル-プロリルcis-trans異性化酵素であるシクロフィリン40（Cyp40）をコードしています。クライアントタンパク質の立体構造の成熟やアセンブリを促進することで、Cyp40はプロテオスタシス、ステロイド受容体シグナル伝達、ならびにタンパク質のフォールディングと品質管理に関連するストレス応答経路に影響を与えます。Ppidはまた、シャペロン依存的な機構を介して、ミトコンドリアにおけるタンパク質ハンドリングの制御やアポトーシス感受性の調節にも関与することが示唆されています。シャペロン—イムノフィリン・ネットワークの異常は、神経変性、炎症、がんに伴うプロテオーム・ストレスといった文脈で頻繁に研究されており、そのためPpidはマウス系で機構解明を行う際の有用な解析ノードとなります。

Cyclophilin 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpid遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppid内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppidのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cyclophilin 40タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cyclophilin 40シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppid欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cyclophilin 40の機能に不可欠なPpidエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppidゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cyclophilin 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCyclophilin 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppid遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cyclophilin 40 HDRプラスミド（m）および Cyclophilin 40 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpidホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpid標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。