CRSP130 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406593

Panoramica

MED23 codifica CRSP130, una subunità centrale del complesso Mediator che collega fattori di trascrizione specifici per sequenza alla RNA polimerasi II, coordinando l’avvio della trascrizione e i programmi di espressione genica dipendenti dai segnali. CRSP130 contribuisce a integrare input regolatori provenienti da vie di sviluppo e da vie responsabili della risposta allo stress, modulando l’attività dei promotori e il controllo trascrizionale associato alla cromatina. Attraverso la regolazione, dipendente da Mediator, di ampie reti geniche, MED23 è stato collegato in letteratura a stati alterati di crescita e differenziamento cellulare e a output trascrizionali deregolati osservati in diversi contesti patologici. Il suo ruolo centrale nei circuiti trascrizionali rende MED23 un bersaglio utile per analizzare la comunicazione tra vie di segnalazione e promotori e la dipendenza dai fattori di trascrizione in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CRSP130 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MED23 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MED23 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MED23 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CRSP130.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MED23 per lo studio della segnalazione di CRSP130, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MED23 critici per la funzione di CRSP130
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MED23 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CRSP130 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CRSP130 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MED23. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CRSP130 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CRSP130 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MED23 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MED23 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.