CPSF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407012

概要

CPSF2（cleavage and polyadenylation specificity factor subunit 2）は、哺乳類のmRNA 3′末端プロセシング機構を構成する中核因子であり、ポリ(A)付加シグナルの認識および切断・ポリ(A)付加複合体の組み立てに寄与します。CPSF2は、pre-mRNAの切断とポリ(A)テール付加に関わることで転写産物の成熟、mRNAの安定性、翻訳効率に影響を与え、結果として遺伝子発現プログラム全体の形成に関与します。さらに、CPSF2依存的な3′末端プロセシングは、転写終結や選択的ポリ(A)付加（alternative polyadenylation）とも連動しており、増殖や分化の過程でトランスクリプトームを再編するこれらのプロセスに関与します。3′末端形成やポリ(A)部位選択の破綻は、疾患に関連した発現状態でしばしば観察されるため、CPSF2はRNAプロセシング表現型とその下流の細胞学的影響を調べる上で有用な結節点となります。

CPSF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCPSF2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CPSF2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CPSF2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CPSF2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CPSF2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CPSF2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CPSF2の機能に不可欠なCPSF2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CPSF2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CPSF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCPSF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CPSF2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CPSF2 HDRプラスミド（h）および CPSF2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCPSF2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCPSF2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。