CHMP6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406179

概要

CHMP6（charged multivesicular body protein 6）は、エンドソーム膜の再構築と多胞体（multivesicular body：MVB）形成を協調的に制御するESCRT-III複合体の中核構成因子であり、カーゴの選別およびリソソーム分解を可能にします。ESCRT依存的な膜切断を介して、CHMP6は受容体のダウンモジュレーション、エクソソーム関連輸送、さらに広範なプロテオスタシスおよびシグナル伝達の恒常性の調節に寄与します。ESCRT経路の異常は、エンドリソソーム輸送、細胞質分裂、オートファジー、ウイルス出芽の欠陥と関連付けられており、これらのプロセスはがんや神経変性でしばしば変化します。そのためCHMP6は、小胞輸送の表現型、受容体シグナル伝達ダイナミクス、ならびにエンドソーム機能障害に結び付いたストレス応答への関与を明らかにする目的で、日常的に研究対象とされています。

CHMP6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCHMP6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CHMP6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CHMP6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CHMP6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CHMP6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CHMP6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CHMP6の機能に不可欠なCHMP6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CHMP6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CHMP6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCHMP6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CHMP6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CHMP6 HDRプラスミド（h）および CHMP6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCHMP6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCHMP6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。