CA XI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419451

Übersicht

Das Mausgen *Car11* kodiert die Carboanhydrase XI (CA XI), ein Mitglied der Carboanhydrase-Familie, von dem angenommen wird, dass es zur zellulären pH-Regulation sowie zum Bicarbonat-/CO₂-Handling in metabolischen Mikroumgebungen beiträgt, wobei seine katalytische Aktivität im Vergleich zu klassischen Carboanhydrasen als atypisch beschrieben wird. Die Expression von CA XI wurde mit neuralen Geweben in Verbindung gebracht, was darauf hindeutet, dass *Car11* an Prozessen beteiligt ist, die mit neuronaler Physiologie sowie der Ionen- und pH-Homöostase zusammenhängen. Über Effekte auf das intrazelluläre und extrazelluläre Säure-Basen-Gleichgewicht kann *Car11* mit Signalwegen verknüpft sein, die den Zellstoffwechsel, die Differenzierung und die Anpassung an die Mikroumgebung beeinflussen. Eine dysregulierte pH-Kontrolle und veränderte Expressionsmuster von Mitgliedern der Carboanhydrase-Familie sind relevant für Untersuchungen der Neurobiologie und des krankheitsassoziierten metabolischen Remodellings in experimentellen Modellen.

Das CA XI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Car11-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Car11-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Car11 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CA XI-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Car11-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CA XI-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Car11-Exone abzielen, die für die CA XI-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Car11-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CA XI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CA XI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Car11-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CA XI HDR-Plasmid (m) und CA XI HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Car11-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Car11-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.