Plasmide CRISPR d'Activation (m) B7RP-1: sc-424469-ACT

Le gène murin *Icosl* code le ligand co‑stimulant B7RP‑1 (ICOSL/CD275), un membre de la superfamille des immunoglobulines exprimé par les cellules présentatrices d’antigène ainsi que par certains compartiments stromaux non hématopoïétiques. La liaison d’ICOS sur les lymphocytes T activés favorise une signalisation dépendante de PI3K qui soutient la différenciation des T auxiliaires folliculaires, les réactions des centres germinatifs et la production d’anticorps après commutation de classe, ce qui relie ICOSL à la régulation de la polarisation de l’immunité adaptative. La communication médiée par ICOSL influence également les réseaux de cytokines qui déterminent l’équilibre Th1/Th2/Th17 et le trafic des cellules immunitaires au sein des tissus lymphoïdes. Une signalisation ICOS–ICOSL dérégulée est fréquemment étudiée dans des modèles d’auto‑immunité, d’inflammation chronique, d’allergie et de modulation immunitaire associée aux tumeurs, où une co‑stimulation altérée peut modifier les réponses immunitaires humorales et cellulaires.

B7RP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Icosl sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

B7RP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Icosl dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Icosl, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de B7RP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Icosl natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de B7RP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie B7RP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Icosl silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.