AWP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425748

概要

Zfand6は、ユビキチン依存的なタンパク質分解の制御や細胞ストレス応答シグナルに関与するとされる、亜鉛フィンガーAN1型ドメイン含有タンパク質AWP1をコードします。AWP1は、ユビキチン化基質やユビキチンリガーゼネットワークの構成要素との相互作用を介して、NF-κBシグナル伝達を含む炎症および自然免疫経路の調節に関与することが示唆されています。マウス系では、Zfand6の発現と機能は、プロテオスタシス、シグナル伝達、ならびにサイトカインやストレスに対する細胞応答の文脈で研究されています。ユビキチン介在性制御と炎症シグナルの破綻は、がん生物学、神経変性、免疫駆動性病態の基盤機構と広く関連しているため、Zfand6は経路解析における有用なノードとなります。

AWP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるZfand6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Zfand6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Zfand6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AWP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AWP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Zfand6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AWP1の機能に不可欠なZfand6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Zfand6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AWP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAWP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Zfand6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AWP1 HDRプラスミド（m）および AWP1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZfand6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZfand6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。