ArgRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409431

概要

RARSはヒトのアルギニルtRNA合成酵素（ArgRS）をコードしており、ArgRSは細胞質に存在するアミノアシルtRNA合成酵素として、対応するtRNAにアルギニンを結合させることで、翻訳の忠実性と効率的なタンパク質合成を担います。ArgRSはRNA代謝および翻訳の中核経路に関与し、細胞ストレス応答やシグナル伝達プログラムとタンパク質生合成を協調させるマルチ合成酵素複合体と機能的に連携することもあります。アミノアシルtRNA合成酵素活性の破綻は、プロテオスタシスの不均衡やストレス応答の変化と関連づけられており、RARSは翻訳制御と細胞の生存・分化を結び付ける機構を検討するうえで重要な遺伝子です。さらにRARSは、tRNAのチャージング（アミノアシル化）やそれに続くプロテオーム品質への影響に関わる疾患関連バリアントの文脈でも研究されています。

ArgRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRARS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RARS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RARSのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ArgRSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ArgRSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RARS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ArgRSの機能に不可欠なRARSエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RARSゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ArgRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびArgRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RARS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ArgRS HDRプラスミド（h）および ArgRS HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRARSホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRARS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。