ALKBH4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406350

概要

ALKBH4は、核酸およびタンパク質に対する酸化的脱メチル化反応に関与するとされる、AlkBファミリーのFe(II)/2-オキソグルタル酸依存性ジオキシゲナーゼの一員をコードしています。ヒトALKBH4はアクチン細胞骨格の動態や細胞構造の制御との関連が示されており、細胞移動、接着、分裂といった過程における役割と整合します。これらの作用を通じて、ALKBH4はゲノム安定性、ストレス応答、転写または転写後制御の文脈で研究されることが多いです。ALKBH4の発現量や機能の変化は、がんを含む複数の疾患関連の状況で検討されており、細胞骨格リモデリングやDNA/RNA代謝がしばしば破綻するがん関連表現型との関係も注目されています。

ALKBH4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるALKBH4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ALKBH4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ALKBH4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ALKBH4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ALKBH4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ALKBH4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ALKBH4の機能に不可欠なALKBH4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ALKBH4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ALKBH4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびALKBH4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ALKBH4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ALKBH4 HDRプラスミド（h）および ALKBH4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはALKBH4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のALKBH4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。