5-LO Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419091
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- 5-LO El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico 5-LO, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: 5-LO Anticuerpo (33): sc-136195
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
5-LO Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419091 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Alox5 codifica la 5‑lipoxigenasa (5‑LO), una dioxigenasa de hierro no hemo que cataliza los primeros pasos comprometidos de la biosíntesis de leucotrienos a partir del ácido araquidónico. La actividad de la 5‑LO, coordinada con FLAP y las sintasas aguas abajo, impulsa la producción de LTB4 y de leucotrienos cisteinílicos que regulan la quimiotaxis de leucocitos, la permeabilidad vascular y el tono bronquial. Esta vía se cruza con la señalización inmunitaria innata y con redes de mediadores lipídicos inflamatorios, influyendo en la función de macrófagos y neutrófilos, así como en el equilibrio de eicosanoides. La desregulación de la señalización Alox5/5‑LO se ha relacionado en modelos murinos con fenotipos inflamatorios de las vías respiratorias y alérgicos, inflamación aterosclerótica y remodelación del microambiente tumoral.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO 5-LO (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Alox5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Alox5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Alox5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína 5-LO.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Alox5 para la investigación de la señalización de 5-LO, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Alox5 críticos para la función de 5-LO
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Alox5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido 5-LO CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido 5-LO CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Alox5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR 5-LO (m) y el plásmido HDR 5-LO (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Alox5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Alox5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.