4E-BP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420149

概要

マウスのEif4ebp1は4E-BP1をコードしており、4E-BP1はキャップ依存的翻訳の抑制因子としてEIF4Eに結合し、eIF4F複合体の形成を制限することで、栄養や増殖因子からのシグナルに応じてmRNA翻訳開始を調節します。4E-BP1はPI3K–AKT–mTORC1経路の主要な下流エフェクターであり、mTORC1によるリン酸化によってEIF4Eの隔離が解除され、細胞増殖、代謝、ストレス適応に関わる転写産物の選択的翻訳が促進されます。この翻訳チェックポイントを介して、Eif4ebp1はオートファジー、細胞周期の進行、ならびにプロテオスタシス関連プログラムの制御に寄与します。4E-BP1シグナルの破綻は、がん生物学、代謝異常、神経発生および神経変性過程のモデルにおいて、mTOR経路の異常活性を示す分子指標として広く用いられています。

4E-BP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEif4ebp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Eif4ebp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eif4ebp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、4E-BP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、4E-BP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Eif4ebp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 4E-BP1の機能に不可欠なEif4ebp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eif4ebp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 4E-BP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）および4E-BP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Eif4ebp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  4E-BP1 HDRプラスミド（m）および 4E-BP1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEif4ebp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEif4ebp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。