γB-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419829

概要

Crygb は、脊椎動物の眼の水晶体で高発現する構造タンパク質クリスタリンである γB-クリスタリンをコードしており、屈折率の維持と長期的な水晶体透明性に寄与します。βγ-クリスタリン・スーパーファミリーの一員として、γB-クリスタリンは水晶体線維細胞の構築を保ち、酸化ストレスなどのタンパク質毒性ストレス下での凝集に抵抗する高密度なタンパク質ネットワークに関与します。クリスタリンの恒常性が破綻すると、タンパク質の可溶性変化、線維細胞配列の破綻、光散乱の増加といった、白内障様プロセスに関連する表現型につながります。そのためマウス Crygb は、水晶体の発生、プロテオスタシス経路、ならびにクリスタリンの安定性や相挙動の機構を研究するうえで有用な遺伝学的な入口となります。

γB-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCrygb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Crygb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Crygbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、γB-crystallinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、γB-crystallinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Crygb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• γB-crystallinの機能に不可欠なCrygbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Crygbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• γB-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびγB-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Crygb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  γB-crystallin HDRプラスミド（m）および γB-crystallin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCrygbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCrygb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。