β-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402248

概要

CSN2はヒトβ-カゼインをコードしており、β-カゼインは分泌性のリン酸化タンパク質で、乳の主要成分を構成します。カゼインミセル内でカルシウムおよびリン酸を結合することで、新生児の栄養に寄与します。その発現は、乳腺上皮の分化および授乳期に厳密に制御されており、プロラクチン受容体–JAK2/STAT5シグナル伝達を介した内分泌シグナルを統合し、分泌プログラムを形成する協調的な経路と連携します。CSN2の転写産物量は、細胞ベースのモデルにおいて機能的な乳汁分泌（ラクトジェニック）分化や乳腺発生状態の指標（マーカー）として一般的に用いられています。CSN2を含む乳タンパク質遺伝子プログラムの制御破綻は、乳腺上皮の可塑性や乳腺生物学の研究において重要であり、分化シグネチャーの変化が疾患関連表現型に伴って見られることがあります。

β-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCSN2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CSN2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CSN2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β-caseinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β-caseinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CSN2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β-caseinの機能に不可欠なCSN2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CSN2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびβ-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CSN2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β-casein HDRプラスミド（h）および β-casein HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCSN2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCSN2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。