Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
βB3-crystallin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419827
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- βB3-crystallin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico βB3-crystallin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: βB3-crystallin Anticuerpo (G-3): sc-374374
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
βB3-crystallin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419827 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Crybb3 codifica la βB3-cristalina, una proteína estructural de la familia de las β/γ-cristalinas que contribuye a la arquitectura de las células de las fibras del cristalino, al ordenamiento de largo alcance y al mantenimiento de la transparencia. La βB3-cristalina participa en el ensamblaje de complejos de cristalinas y favorece la estabilidad proteica y las propiedades refractivas durante el desarrollo y la maduración del cristalino. La alteración de la homeostasis de las cristalinas puede promover la agregación de proteínas, cambios en el equilibrio redox y la dispersión de la luz en el cristalino, lo que vincula a Crybb3 con vías que regulan la proteostasis y las respuestas celulares al estrés en el cristalino ocular. En modelos de ratón, las perturbaciones en la composición de las cristalinas se estudian con frecuencia en el contexto de la degeneración del cristalino y de fenotipos similares a cataratas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO βB3-crystallin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Crybb3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Crybb3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Crybb3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína βB3-crystallin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Crybb3 para la investigación de la señalización de βB3-crystallin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Crybb3 críticos para la función de βB3-crystallin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Crybb3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido βB3-crystallin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido βB3-crystallin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Crybb3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR βB3-crystallin (m) y el plásmido HDR βB3-crystallin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Crybb3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Crybb3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.