α Enolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420178

概要

Eno1はαエノラーゼをコードしており、解糖系において2-ホスホグリセリン酸をホスホエノールピルビン酸へ変換する反応を触媒する、保存性の高い金属酵素である。これにより、多様な栄養条件下でのATP産生および炭素フラックスを支える。典型的な代謝酵素としての役割にとどまらず、ENO1はより広範な代謝リプログラミングにも関与し、解糖系フラックスへの影響を介して、レドックスバランス、低酸素適応、細胞ストレス応答に影響を及ぼし得る。ENO1の発現や活性の変化は増殖性および炎症性の表現型と関連づけられており、エネルギー代謝ががん遺伝子シグナル伝達や免疫細胞機能と交差する文脈でしばしば研究対象となる。マウス系では、Eno1は細胞増殖、遊走、ならびに微小環境からの刺激への応答を形作る解糖系連関メカニズムを解明するうえで、扱いやすい解析ノードとして機能する。

α Enolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEno1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Eno1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eno1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α Enolaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α Enolaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Eno1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α Enolaseの機能に不可欠なEno1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eno1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α Enolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびα Enolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Eno1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α Enolase HDRプラスミド（m）および α Enolase HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEno1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEno1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。