WRN Plasmide Double Nickase (h): sc-401860-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- WRN Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il WRN Double Nickase Plasmid (h) e il WRN Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira WRN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: WRN Antibody (D-6): sc-376182
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
WRN Plasmide Double Nickase (h) | sc-401860-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
WRN Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401860-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WRN codifica una DNA elicasi/esonucleasi della famiglia RecQ che coordina la replicazione del DNA, la ricombinazione e molteplici processi di riparazione del DNA, tra cui la riparazione per escissione di basi e la ricombinazione omologa. WRN sostiene la stabilità della forcella replicativa e partecipa al mantenimento dei telomeri, contribuendo così all’integrità del genoma durante la fase S e in risposta allo stress replicativo. La perdita della funzione di WRN è associata alla sindrome di Werner ed è collegata a senescenza cellulare precoce, instabilità cromosomica e alterata segnalazione del danno al DNA. WRN è inoltre studiato per il suo ruolo in contesti di instabilità dei microsatelliti e per le interazioni di via con la segnalazione ATR/ATM, la riparazione dipendente da PARP e il controllo dei checkpoint.
WRN Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus WRN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di WRN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di WRN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con WRN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.