PU.1/Spi1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400547-LAC

SPI1 codifica il fattore di trascrizione PU.1 (Spi1) della famiglia ETS, un regolatore determinante della linea cellulare della differenziazione ematopoietica che coordina lo sviluppo delle cellule mieloidi e dei linfociti B. PU.1 si lega a motivi ETS per controllare programmi coinvolti nella segnalazione dell’immunità innata, nella presentazione dell’antigene e nella funzione dei fagociti, integrando segnali provenienti dalle vie citochine/JAK-STAT, NF-κB e dei recettori Toll-like. La sua attività, sensibile al dosaggio, modella l’accessibilità della cromatina e le reti trascrizionali che regolano l’impegno dei progenitori e la maturazione di macrofagi, neutrofili e cellule dendritiche. Un’espressione o un’attività disregolata di SPI1 è implicata nelle neoplasie ematologiche e nella disfunzione immunitaria, rendendolo un nodo chiave per lo studio dei circuiti trascrizionali leucemogeni e della regolazione dei geni infiammatori.

Le particelle di attivazione lentivirale PU.1/Spi1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SPI1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PU.1/Spi1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SPI1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PU.1/Spi1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SPI1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.