PRDM16 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403464-ACT

PRDM16 kodiert einen Transkriptionsregulator mit PR/SET-Domäne, der Zellschicksalsprogramme koordiniert, indem er den Chromatinzustand und Genexpressionsnetzwerke moduliert. In menschlichen Zellen verknüpft PRDM16 die Festlegung der Zelllinie mit der Stoffwechselregulation und beeinflusst Signalwege, die mit mitochondrialer Biogenese, oxidativem Stoffwechsel und entwicklungsbezogenen Transkriptionsschaltkreisen verbunden sind. Es ist an transkriptionellen und epigenetischen Kontrollprozessen beteiligt, unter anderem über Interaktionen mit Ko‑Regulatoren, die Enhancer-Aktivität und Differenzierungsverläufe prägen. Eine fehlregulierte PRDM16-Expression oder -Funktion wurde mit veränderter Fettgewebsbiologie, kardiometabolischen Phänotypen und hämatopoetischen Transkriptionsprogrammen in Zusammenhang gebracht, wodurch PRDM16 ein nützlicher Knotenpunkt für mechanistische Studien zu Differenzierung und Stoffwechsel ist.

PRDM16 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PRDM16-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRDM16 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PRDM16-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PRDM16-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRDM16-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PRDM16-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRDM16-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRDM16-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PRDM16-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.