PDGF Receptor alpha/PDGFRA Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400107-ACT

PDGFRA codifica il recettore alfa del fattore di crescita derivato dalle piastrine (platelet-derived growth factor receptor alpha), una tirosin-chinasi recettoriale che lega i ligandi PDGF per avviare l’autofosforilazione e la segnalazione a valle attraverso le vie PI3K–AKT, RAS–MAPK e PLCγ. Questa segnalazione regola la proliferazione, la sopravvivenza e la migrazione cellulare, nonché il rimodellamento della matrice extracellulare, con ruoli di rilievo nella biologia mesenchimale e stromale durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. Un’attività deregolata di PDGFRA è implicata in programmi anomali di segnalazione dei fattori di crescita osservati in molteplici contesti associati al cancro e in microambienti fibroproliferativi e infiammatori. In quanto nodo chinasi di superficie cellulare, PDGFRA è spesso studiato per i meccanismi che controllano il traffico del recettore, le cinetiche di segnalazione dipendenti dal ligando e il crosstalk tra vie di segnalazione.

PDGF Receptor alpha/PDGFRA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PDGFRA senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PDGF Receptor alpha/PDGFRA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PDGFRA nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PDGFRA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PDGF Receptor alpha/PDGFRA. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PDGFRA nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PDGF Receptor alpha/PDGFRA nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PDGF Receptor alpha/PDGFRA nelle cellule tumorali con espressione di PDGFRA silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.