PDGF Receptor alpha/PDGFRACRISPR激活质粒(h): sc-400107-ACT

PDGFRA 编码血小板源性生长因子受体 α（platelet-derived growth factor receptor alpha），这是一种受体型酪氨酸激酶，可结合 PDGF 配体并启动自磷酸化，继而通过 PI3K–AKT、RAS–MAPK 和 PLCγ 通路介导下游信号传导。该信号调控细胞增殖、生存、迁移以及细胞外基质重塑，并在发育及组织稳态维持过程中、尤其在间充质与基质细胞生物学中发挥重要作用。PDGFRA 活性失调与多种癌症相关情境中异常的生长因子信号程序有关，也与成纤维增殖性及炎症性微环境相关。作为细胞表面激酶信号节点，PDGFRA 常被用于研究受体转运的调控机制、配体依赖的信号动力学以及通路间串扰。

PDGF Receptor alpha/PDGFRA CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PDGFRA的表达。

PDGF Receptor alpha/PDGFRA CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PDGFRA基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PDGFRA转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PDGF Receptor alpha/PDGFRA表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PDGFRA位点，并能够研究内源性位点上依赖于PDGF Receptor alpha/PDGFRA的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PDGFRA表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PDGF Receptor alpha/PDGFRA通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。