p38 gamma MAPK12 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400427-ACT

MAPK12 codifica p38γ, una chinasi proteica attivata dallo stress appartenente alla famiglia delle MAPK (mitogen-activated protein kinase), che integra segnali extracellulari in programmi dipendenti dalla fosforilazione che controllano la trascrizione, la dinamica del citoscheletro e l’adattamento metabolico. Come parte della rete di segnalazione delle p38 MAPK, p38γ partecipa alle risposte alle citochine infiammatorie e allo stress ambientale, contribuendo alla regolazione a valle dell’espressione genica e del turnover proteico. L’attività di MAPK12 è stata implicata nella differenziazione cellulare e nella segnalazione specifica di tessuto, con collegamenti riportati a contesti di segnalazione oncogena e a fenotipi infiammatori in cui è comune un riassetto delle vie MAPK. Queste caratteristiche rendono p38γ/MAPK12 un nodo utile per analizzare il crosstalk della segnalazione da stress con MAPK/ERK, con programmi associati a NF-κB e con altri circuiti regolatori guidati da chinasi.

p38 gamma MAPK12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAPK12 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

p38 gamma MAPK12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAPK12 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAPK12, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di p38 gamma MAPK12. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAPK12 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da p38 gamma MAPK12 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via p38 gamma MAPK12 nelle cellule tumorali con espressione di MAPK12 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.