Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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MCAD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418938
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MCAD Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MCAD, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MCAD Antibody (E-8): sc-271931
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MCAD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-418938 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Acadm codifica l’acil-CoA deidrogenasi a catena media (MCAD), una flavoproteina mitocondriale che catalizza il primo passaggio di deidrogenazione nella β-ossidazione degli acidi grassi a catena media, collegando il catabolismo lipidico alla produzione cellulare di ATP e all’equilibrio redox. L’attività di MCAD sostiene la flessibilità metabolica durante il digiuno e in condizioni di elevata richiesta energetica, alimentando il ciclo del TCA e la fosforilazione ossidativa tramite acetil-CoA e il trasferimento di elettroni attraverso ETF/ETFDH. L’alterazione di Acadm compromette l’ossidazione mitocondriale degli acidi grassi, modifica i profili di acilcarnitine e può favorire effetti secondari sulle risposte allo stress ossidativo e sulle reti di segnalazione lipidica. La carenza di MCAD è un errore congenito del metabolismo ben caratterizzato associato a un utilizzo inefficiente degli acidi grassi, rendendo Acadm un nodo rilevante per lo studio dell’omeostasi metabolica mitocondriale in modelli murini.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MCAD (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acadm in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acadm insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acadm a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MCAD.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acadm per lo studio della segnalazione di MCAD, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Acadm critici per la funzione di MCAD
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acadm per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MCAD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MCAD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acadm. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MCAD Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MCAD (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acadm per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acadm definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.