MBNL3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406573

Panoramica

MBNL3 (muscleblind-like splicing regulator 3) è una proteina legante l’RNA che riconosce i motivi YGCY nei pre-mRNA per controllare lo splicing alternativo, la stabilità dell’mRNA e la sua localizzazione. Partecipa a programmi di regolazione genica post-trascrizionale che modellano le transizioni di stato cellulare, incluse decisioni di splicing associate alla differenziazione e la selezione di isoforme trascrittomiche specifiche di tessuto. Le proteine della famiglia MBNL sono nodi centrali in reti di processamento dell’RNA collegate all’organizzazione del citoscheletro, all’output di segnalazione e al rimodellamento metabolico tramite una regolazione dipendente dalle isoforme. La disregolazione dello splicing mediato da MBNL è stata implicata in meccanismi di malattie neuromuscolari guidate da tossicità dell’RNA e in perturbazioni più ampie dello splicing a livello dell’intero trascrittoma osservate in contesti di sviluppo e associati al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MBNL3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MBNL3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MBNL3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MBNL3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MBNL3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MBNL3 per lo studio della segnalazione di MBNL3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MBNL3 critici per la funzione di MBNL3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MBNL3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MBNL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MBNL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MBNL3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MBNL3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MBNL3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MBNL3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MBNL3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.