LHR Plasmide Double Nickase (h): sc-400750-NIC

LHCGR codifica il recettore dell’ormone luteinizzante/gonadotropina corionica (LHR), un GPCR responsivo alle gonadotropine che regola l’endocrinologia riproduttiva nelle cellule steroidogeniche. Il legame del ligando attiva la segnalazione Gs/adenilato ciclasi, aumentando il cAMP e stimolando programmi trascrizionali dipendenti da PKA che controllano la biosintesi degli steroidi, l’ovulazione e la produzione di androgeni nelle cellule di Leydig, con un ulteriore accoppiamento alle vie PLC/PKC e MAPK che modulano proliferazione e differenziamento. La segnalazione di LHR si integra con reti di sviluppo gonadico e metaboliche, influenzando l’espressione di enzimi steroidogenici come STAR e membri della famiglia CYP. La disregolazione o le varianti genetiche di LHCGR sono state associate a disturbi dello sviluppo sessuale, fenotipi di fertilità e fisiopatologia ovarica e testicolare ormono-dipendente, rilevanti per modelli di ricerca meccanicistica.

LHR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LHCGR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LHCGR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LHCGR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LHCGR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.