KV1.3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421214
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- KV1.3 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico KV1.3, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: KV1.3 Anticuerpo (G-9): sc-398855
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
KV1.3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421214 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Kcna3 codifica el canal de potasio dependiente de voltaje KV1.3, un canal de la familia Shaker que regula el potencial de membrana y el eflujo de potasio para modular la señalización de calcio, los umbrales de activación y la excitabilidad eléctrica. En células inmunitarias y gliales, la actividad de KV1.3 influye en cascadas de señalización vinculadas a la proliferación, la producción de citocinas y la reprogramación metabólica al controlar programas transcripcionales dependientes de Ca2+. La función del canal se entrecruza con vías que gobiernan la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés, y la actividad alterada de KV1.3 se ha asociado con desregulación inmunitaria y mecanismos inflamatorios. En el sistema nervioso, KV1.3 contribuye a la excitabilidad y a dinámicas de señalización relevantes para la neuroinflamación y la comunicación neurona-glía.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO KV1.3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Kcna3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Kcna3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Kcna3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KV1.3.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Kcna3 para la investigación de la señalización de KV1.3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Kcna3 críticos para la función de KV1.3
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Kcna3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido KV1.3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido KV1.3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Kcna3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KV1.3 (m) y el plásmido HDR KV1.3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Kcna3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Kcna3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.