GPR39 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427882

Panoramica

Gpr39 codifica GPR39, un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) sensibile allo zinco, implicato nella regolazione di cascate di segnalazione intracellulare che determinano la sopravvivenza cellulare, la secrezione e il tono infiammatorio. Nei modelli murini, l’attività di GPR39 è stata associata alla modulazione di vie dipendenti da cAMP e Ca2+ e della segnalazione chinasi a valle, influenzando la funzione di barriera epiteliale, la segnalazione neuronale e l’omeostasi metabolica. Alterazioni della segnalazione di GPR39 sono state studiate in contesti che includono disfunzione metabolica, infiammazione gastrointestinale e fenotipi neurocomportamentali, rendendolo un nodo utile per l’analisi delle vie di segnalazione. In quanto recettore di membrana che integra segnali extracellulari con output trascrizionali e metabolici, GPR39 rappresenta un bersaglio maneggevole per scomporre e studiare le reti guidate dai GPCR in vivo e in cellule coltivate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR39 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gpr39 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gpr39 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gpr39 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR39.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gpr39 per lo studio della segnalazione di GPR39, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gpr39 critici per la funzione di GPR39
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gpr39 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR39 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GPR39 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gpr39. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR39 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GPR39 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gpr39 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gpr39 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.