FOXC1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421637-ACT

Foxc1は、フォークヘッドボックス型転写因子FOXC1をコードしており、配列特異的にDNAへ結合して転写を制御する調節因子です。FOXC1は、発生パターン形成、細胞運命決定、分化プログラムの制御に関与します。マウスにおいてFOXC1は、間葉–上皮相互作用、細胞外マトリックスのリモデリング、ならびにTGF-β/BMPやWNTといったモルフォゲン駆動性経路に関わる転写ネットワーク全体のシグナルを統合し、器官形成と組織恒常性を形作ります。FOXC1の発現量（ドーザージ）や制御活性の異常は、先天性の前眼部形成異常や頭蓋顔面の表現型と関連し、がん生物学においては細胞同一性の破綻や浸潤性の遺伝子発現シグネチャーとも関連づけられています。これらの特性により、FOXC1は、発生、幹細胞様状態、微小環境応答を司る遺伝子制御回路を解明するうえで有用な結節点となります。

FOXC1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Foxc1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FOXC1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Foxc1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFoxc1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FOXC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFoxc1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFOXC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFoxc1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFOXC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。