FANCC Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416477-ACT

Il gene umano **FANCC** codifica un componente essenziale della via di riparazione del DNA della **anemia di Fanconi (FA)**, che coordina la risposta ai **crosslink interfilamento** del DNA e alle lesioni associate alla replicazione. FANCC partecipa alla formazione e alla funzione del **complesso core FA**, favorendo la **monoubiquitinazione di FANCD2/FANCI** e il successivo coinvolgimento della **ricombinazione omologa** e dei meccanismi di **stabilizzazione della forcella di replicazione**. Attraverso queste attività, FANCC contribuisce all’integrità del genoma, al coordinamento dei checkpoint del ciclo cellulare e alla protezione dallo stress genotossico endogeno ed esogeno. L’alterazione o la disfunzione di FANCC è associata alla biologia dell’anemia di Fanconi e a fenotipi più ampi di instabilità genomica, rilevanti per studi sui meccanismi dell’insufficienza midollare e sulle vulnerabilità della riparazione del DNA legate al cancro.

FANCC Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FANCC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FANCC Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FANCC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FANCC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FANCC. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FANCC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FANCC nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FANCC nelle cellule tumorali con espressione di FANCC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.