ErbB4/HER4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420220

Panoramica

Erbb4 codifica la tirosin-chinasi recettoriale ErbB4/HER4, un membro della famiglia EGFR/ErbB che lega le neureguline e altri ligandi di tipo EGF per regolare la segnalazione cellula‑cellula. In seguito alla dimerizzazione indotta dal ligando, ErbB4 attiva cascate a valle tra cui PI3K–AKT, RAS–RAF–MEK–ERK, JAK–STAT e PLCγ/PKC, modulando programmi di proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e migrazione. Nei tessuti murini, ErbB4 è particolarmente importante nello sviluppo del sistema nervoso e nella segnalazione sinaptica, nonché nella biologia epiteliale e cardiaca, dove contribuisce alla definizione dei pattern e all’omeostasi guidate dai fattori di crescita. Una segnalazione di ErbB4 deregolata e un’alterata comunicazione tra vie (crosstalk) sono state implicate in reti di segnalazione legate al cancro e in fenotipi neurologici, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico per studi di via e di relazione genotipo‑fenotipo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ErbB4/HER4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Erbb4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Erbb4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Erbb4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ErbB4/HER4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Erbb4 per lo studio della segnalazione di ErbB4/HER4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Erbb4 critici per la funzione di ErbB4/HER4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Erbb4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ErbB4/HER4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ErbB4/HER4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Erbb4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ErbB4/HER4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ErbB4/HER4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Erbb4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Erbb4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.