CDKN2B/p15 INK4B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-400570-KO-2

Panoramica

CDKN2B codifica p15^INK4B, un inibitore delle chinasi ciclina-dipendenti che si lega a CDK4/6 per limitare la fosforilazione di RB dipendente dalla ciclina D e far rispettare il checkpoint G1/S. La sua espressione è comunemente indotta da segnali antiproliferativi come la via di segnalazione del TGF-β, collegando lo stress extracellulare e i programmi di differenziamento all’arresto del ciclo cellulare e alla senescenza. CDKN2B è localizzato nel locus 9p21, una regione genomica frequentemente alterata nei tumori e implicata nella suscettibilità a diversi tratti legati all’invecchiamento e cardiometabolici. La disregolazione del controllo di CDK4/6 mediato da p15^INK4B contribuisce a una proliferazione aberrante, a un alterato impegno di linea e alla fuga dalle vie di inibizione della crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CDKN2B/p15 INK4B (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDKN2B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDKN2B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDKN2B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CDKN2B/p15 INK4B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDKN2B per lo studio della segnalazione di CDKN2B/p15 INK4B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDKN2B critici per la funzione di CDKN2B/p15 INK4B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDKN2B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDKN2B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CDKN2B/p15 INK4B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CDKN2B/p15 INK4B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDKN2B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDKN2B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.