BBS2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404725-ACT

BBS2 codifica uma subunidade central do complexo BBSome, um revestimento multimérico que regula o tráfego de proteínas de membrana ciliar e a competência de sinalização do cílio primário. Por meio de interações com a maquinaria de transporte intraflagelar e pequenas GTPases, o BBS2 ajuda a coordenar a exportação/importação de cargas e a localização de receptores que influenciam vias como Hedgehog e outros programas de sinalização dependentes de cílios. A disrupção de BBS2 perturba a ciliogênese e o transporte ciliar, levando a alterações da homeostase celular em tecidos que dependem da sinalização ciliar. Variantes em BBS2 estão implicadas na síndrome de Bardet–Biedl e em fenótipos de ciliopatias relacionadas, tornando-o um alvo útil para estudar mecanismos de doença mediados por cílios.

BBS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BBS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BBS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BBS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BBS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BBS2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BBS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BBS2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BBS2 em células tumorais com expressão de BBS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.