apolipoprotein E/apoE Plasmide Double Nickase (h): sc-400860-NIC

L'APOE umano codifica l'apolipoproteina E (apoE), un componente lipoproteico secreto che media il trasporto di colesterolo e trigliceridi legandosi a recettori quali LDLR e LRP1 e coordinando la rimozione e la ridistribuzione delle lipoproteine. L'apoE influenza l'omeostasi lipidica, il rimodellamento delle membrane e l'endocitosi mediata da recettore, collegandosi così a vie che regolano l'efflusso cellulare di colesterolo, il metabolismo delle particelle lipoproteiche e la segnalazione infiammatoria nei macrofagi residenti nei tessuti e nelle cellule gliali. La variabilità genetica e l'alterata espressione di APOE sono fortemente associate a una gestione disfunzionale dei lipidi e a processi neuroinfiammatori rilevanti per la neurodegenerazione, oltre che alla biologia legata all'aterosclerosi. Di conseguenza, APOE è frequentemente studiato in sistemi che modellano il traffico lipidico, il mantenimento sinaptico e il crosstalk immuno-metabolico.

apolipoprotein E/apoE Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APOE nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APOE. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APOE. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APOE interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.