ACTC1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418966

Panoramica

Actc1 codifica l’actina alfa cardiaca (ACTC1), un componente principale dei filamenti sottili sarcomerici che polimerizza in F-actina e sostiene la generazione di forza nel muscolo striato. ACTC1 agisce in coordinamento con miosina, tropomiosina e il complesso della troponina per regolare la contrazione dipendente dal Ca2+, contribuendo all’assemblaggio delle miofibrille, all’organizzazione del sarcomero e alla meccanotrasduzione del citoscheletro. Nel topo, Actc1 è altamente rilevante per lo sviluppo e il rimodellamento del muscolo cardiaco e scheletrico, collegando la dinamica dei filamenti di actina alle vie che regolano contrattilità, struttura cellulare e risposte allo stress. Alterazioni genetiche e funzionali di ACTC1 sono associate a fenotipi legati a cardiomiopatie e a un’alterata funzione muscolare, rendendolo un nodo utile per studiare cambiamenti rilevanti per la malattia nell’integrità del sarcomero e nella fisiologia cardiaca.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTC1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Actc1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Actc1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Actc1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACTC1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Actc1 per lo studio della segnalazione di ACTC1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Actc1 critici per la funzione di ACTC1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Actc1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACTC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACTC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Actc1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACTC1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACTC1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Actc1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Actc1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.