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Vangl2CRISPR激活质粒(h) | sc-400805-ACT | 20 µg | $397.00 |
VANGL2 编码 Vangl2,它是平面细胞极性(PCP)的核心组分之一,可在发育过程中以及成年上皮组织中协同调控细胞的定向行为与组织结构。Vangl2 参与非经典的 WNT/PCP 信号通路,通过与 Dishevelled 相互作用并经由下游 RhoA/ROCK 与 JNK 通路,影响细胞骨架重塑、极性迁移以及定向细胞分裂。VANGL2 调控异常与汇聚延伸和神经管闭合缺陷相关;PCP 信号失衡也常与上皮组织结构改变有关,这些改变与癌症生物学及神经发育障碍密切相关。作为极性决定因子,Vangl2 也常在纤毛发生、细胞连接完整性以及集体细胞迁移等研究背景中被重点关注。
Vangl2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性VANGL2的表达。
Vangl2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的VANGL2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于VANGL2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Vangl2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的VANGL2位点,并能够研究内源性位点上依赖于Vangl2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在VANGL2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Vangl2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。