Plasmide Double Nickase (h) V-ATPase D2: sc-404907-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) V-ATPase D2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide V-ATPase D2 Double Nickase (h) et le plasmide V-ATPase D2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATP6V0D2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: V-ATPase D2 Antibody (7A4): sc-517031
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) V-ATPase D2 | sc-404907-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) V-ATPase D2 | sc-404907-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V0D2 code la sous-unité D2 de l’ATPase vacuolaire à protons (V‑ATPase), une pompe à protons multi-sous-unités qui acidifie les endosomes, les lysosomes et d’autres compartiments intracellulaires. L’acidification des organites par la V‑ATPase soutient la protéolyse lysosomale, le trafic endocytique, l’autophagie, ainsi que la maturation des récepteurs et des enzymes dépendante du pH, en s’intégrant à des voies qui régulent le métabolisme et la signalisation cellulaires. Dans les cellules de la lignée myéloïde, ATP6V0D2 est impliqué dans la fonction des ostéoclastes et la résorption osseuse via sa contribution au transport des protons nécessaire à la dégradation de la matrice. Une activité de la V‑ATPase dérégulée et une homéostasie altérée du pH vésiculaire sont étudiées dans le contexte des troubles du remodelage osseux et, plus largement, de processus inflammatoires et neurodégénératifs liés à un dysfonctionnement lysosomal.
V-ATPase D2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP6V0D2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP6V0D2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP6V0D2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP6V0D2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.