Plasmide CRISPR d'Activation (m) TBK1: sc-425191-ACT

Le gène murin **Tbk1** code la **TANK-binding kinase 1 (TBK1)**, une kinase sérine/thréonine qui intègre les signaux de l’immunité innée en aval des récepteurs de reconnaissance des motifs (pattern-recognition receptors). TBK1 phosphoryle IRF3/IRF7 et module les réponses associées à NF-κB afin de favoriser la production d’interférons de type I, tout en interagissant également avec l’autophagie et la mitophagie via une signalisation dépendante d’adaptateurs. Dans les systèmes murins, l’altération de l’activité de TBK1 est utilisée pour étudier la dynamique de la signalisation inflammatoire, les interactions hôte–pathogène et la régulation des réponses cellulaires au stress. Les voies liées à TBK1, lorsqu’elles sont dérégulées, sont fréquemment explorées dans des contextes pertinents pour la maladie, impliquant l’inflammation chronique, la neuroinflammation et les dysfonctionnements de l’immunité innée.

TBK1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tbk1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TBK1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tbk1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tbk1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TBK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tbk1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TBK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TBK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Tbk1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.