Plasmide Double Nickase (h) Rheb: sc-400539-NIC

RHEB code pour Rheb, une petite GTPase apparentée à Ras qui agit comme un activateur amont clé de mTORC1 en interagissant directement avec le complexe en réponse aux signaux des facteurs de croissance et des nutriments. En intégrant les signaux provenant du complexe TSC1/TSC2 et de l'état énergétique cellulaire, Rheb contribue à réguler la synthèse protéique, l'autophagie, la biogenèse lysosomale et la croissance cellulaire. Une dérégulation de la signalisation RHEB–mTOR a été associée à une altération du contrôle métabolique et à une prolifération aberrante dans de multiples contextes pertinents pour les maladies, faisant de Rheb un nœud central pour l'étude des rétrocontrôles de la voie et de l'adaptation au stress. Dans les cellules humaines, l'activité de Rheb influence des programmes de traduction et des processus anaboliques susceptibles de remodeler les phénotypes cellulaires en situation de limitation en nutriments ou de stimulation mitogène.

Rheb Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RHEB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RHEB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RHEB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RHEB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.