Plasmide CRISPR d'Activation (h) PLP: sc-401663-ACT

PLP1 code pour la protéine protéolipidique 1 (PLP), un composant structural majeur de la myéline compacte du système nerveux central, qui soutient l’architecture membranaire des oligodendrocytes et une conduction axonale efficace. PLP participe à l’assemblage et au maintien de la gaine de myéline via l’organisation de membranes riches en lipides et des voies de biogenèse de la myéline qui régissent l’intégrité de la substance blanche. Des altérations de la dose ou de la séquence de PLP1 perturbent la myélinisation et la fonction des oligodendrocytes et sont associées à des leucodystrophies hypomyélinisantes héréditaires ainsi qu’à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs apparentés. Par conséquent, PLP1 est fréquemment étudié dans des modèles de différenciation des oligodendrocytes, d’interactions axone–glie et des mécanismes de stabilité de la myéline.

PLP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PLP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PLP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PLP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PLP dans les cellules tumorales présentant une expression de PLP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.