PCCB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426258

Übersicht

Das murine Gen **Pccb** kodiert die Beta‑Untereinheit der Propionyl‑CoA‑Carboxylase (PCCB), eines biotinabhängigen mitochondrialen Enzyms, das die Umwandlung von Propionyl‑CoA zu Methylmalonyl‑CoA katalysiert. Diese Reaktion verknüpft den Abbau verzweigtkettiger Aminosäuren (Valin, Isoleucin), ungeradzahliger Fettsäuren sowie von Cholesterin‑Seitenketten mit einem anaplerotischen Zufluss in den Citratzyklus (TCA‑Zyklus) über Succinyl‑CoA. Die PCCB‑Funktion unterstützt den mitochondrialen Stoffwechsel und die zelluläre Energiehomöostase, indem sie die Anreicherung von aus Propionyl‑CoA abgeleiteten Metaboliten verhindert. Eine Störung der Propionyl‑CoA‑Carboxylase‑Aktivität ist mit der Biologie der Propionazidämie assoziiert, wodurch **Pccb** ein geeigneter Lokus für die Untersuchung von Stoffwechselstress‑Antworten und der Anpassung mitochondrialer Signalwege in Mausmodellen ist.

Das PCCB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pccb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pccb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pccb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PCCB-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pccb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PCCB-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pccb-Exone abzielen, die für die PCCB-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pccb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PCCB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PCCB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pccb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PCCB HDR-Plasmid (m) und PCCB HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pccb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pccb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.