Plasmide CRISPR d'Activation (h) P-Selectin/CD62P/SELP: sc-400441-ACT

SELP code la P‑sélectine (CD62P), un récepteur d’adhésion inductible stocké dans les granules α des plaquettes et dans les corps de Weibel‑Palade des cellules endothéliales, et rapidement exposé à la surface cellulaire lors de l’activation. La P‑sélectine membranaire se lie à PSGL‑1 sur les leucocytes pour initier l’accrochage et le roulement, coordonnant le recrutement leucocytaire précoce au cours de l’inflammation et reliant les lésions vasculaires aux réponses thrombo‑inflammatoires. En régulant les interactions plaquettes–leucocytes et endothélium–leucocytes, SELP influence la signalisation associée à la coagulation, l’activation endothéliale induite par les cytokines et le remodelage du microenvironnement vasculaire. Une expression et une activité dérégulées de la P‑sélectine sont associées à des pathologies vasculaires inflammatoires, à des processus liés à la thrombose et à des interactions plaquettes–tumeur qui influencent la biologie des métastases.

P-Selectin/CD62P/SELP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SELP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

P-Selectin/CD62P/SELP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SELP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SELP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de P-Selectin/CD62P/SELP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SELP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de P-Selectin/CD62P/SELP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie P-Selectin/CD62P/SELP dans les cellules tumorales présentant une expression de SELP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.