Plasmide Double Nickase (m) NPC1: sc-421941-NIC

Le gène murin Npc1 code NPC1, une protéine membranaire lysosomale à passages multiples qui coopère avec NPC2 pour mobiliser le cholestérol non estérifié et d’autres lipides des endosomes tardifs/lysosomes vers les membranes cellulaires. En régulant le trafic intracellulaire des stérols, NPC1 influence l’homéostasie du cholestérol, la fonction lysosomale et les voies de signalisation métaboliques en aval qui dépendent d’une composition lipidique membranaire adéquate. Une altération de l’activité de NPC1 entraîne une accumulation lysosomale de lipides et de profondes perturbations du transport endolysosomal ainsi que des processus associés à l’autophagie. Npc1 est donc largement utilisé comme point d’entrée génétique pour modéliser des phénotypes de stockage lipidique et disséquer les mécanismes de régulation métabolique centrés sur le lysosome dans les cellules murines.

NPC1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Npc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Npc1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Npc1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Npc1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.